1933年8月，经过时任日本陆军大臣荒木贞夫批准，石井四郎在中国东北宣化街与交叉口一带设立了秘密细菌研究基地，并开始使用中国及朝鲜平民做活体实验 。这支臭名昭著的细菌部队冠名为"部队"，石井四郎称自己为"东乡大尉"，目的就是用于纪念自己非常崇拜的日军战神东乡平八郎元帅 。"东乡部队"在这里除了进行了惨绝人寰的、、和活体实验，还进行了活体冻伤实验，以便验证日军士兵在天寒地冻的西伯利亚与俄军交战的耐寒程度 。从目前日本学者披露的资料来看，"东乡部队"以冻死冻残数百名中国平民的代价，验证出了人类的耐寒极限及冻伤后最佳治疗方式为在37度的水里面浸泡的结果 。而那些因为实验而死亡的中国平民，就被丢进了焚尸炉毁尸灭迹 。
1934年秋，石井四郎的"东乡部队"出现了危机 。先是以王子扬为首的12名中国"实验品"成功从研究所逃脱 。接着这个试验所又受到了赵尚志将军领导的抗日联军武装的多次攻击 。为了不泄露这个日本的秘密研究项目 。石井四郎向上级申请，将研究所搬迁到哈尔滨日本陆军医院的南院，并将其对外名称改为关东军，内部编号731 。石井四郎担任该部部长，军衔晋升为陆军中佐 。
1939年，经过两年多的不断扩大，731部队成为一个满员编制为2600人，配有一名中将和四名少将的高级生化、细菌武器兵工厂 。石井四郎也因为在当年日本与苏蒙联军的战役中成功向敌方投掷22.5公斤沙门菌和伤寒菌，给苏蒙联军造成巨大杀伤而荣获个人功四级 。
1940年7月至1941年12月，731部队先后在中国的浙江、湖南等地空投细菌武器，给中国抗日军民造成了重大损失 。
1942年5月浙赣会战，731部队将注入肠伤寒菌、副伤寒菌的馒头分发给3000余名饥肠辘辘的中国战俘吃，然后将这些感染了细菌病毒的战俘放回 。这一毒辣的阴谋直接导致中国军民上万人死亡，百万人为生存逃离灾区成为难民 。事后731部队洋洋得意的在成果报告中写道："派遣队在现地调查的结果，传染病突发并流行中最有效果的是副伤寒菌 。"
1944年，正当石井四郎的731部队在疯狂生产生化、细菌武器参战的时候，其手下查获了石井四郎贪污公款的罪证 。陆军大本营一纸调令，将其调回了本土接受调查 。1945年3月，为了挽回败局，陆军大本营又将石井四郎调回了731担任部长 。石井四郎对调查揭发他贪污的中留金藏中佐实施报复，将其调往太平洋战场，结果中留金藏不到一个月就战死了 。
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